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正常的原代細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞更能代表體內(nèi)細(xì)胞的功能。利用原代細(xì)胞研究相關(guān)通路的分子機(jī)制是更加可靠的。盡管大多數(shù)增殖的、腫瘤來(lái)源的細(xì)胞系可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染方法(如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或聚乙烯亞胺IPE)輕松轉(zhuǎn)染，但轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞仍然是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。原代人肝細(xì)胞(PHH)是臨床前藥物開(kāi)發(fā)中確定藥物代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)和毒性的“金標(biāo)準(zhǔn)”體外模型。

然而，正如非分裂原代細(xì)胞都難以轉(zhuǎn)染一樣，使用者面臨在保持肝細(xì)胞分化和特化功能的同時(shí)又要達(dá)到高效轉(zhuǎn)染的挑戰(zhàn)。原代肝細(xì)胞對(duì)操作和環(huán)境變化非常敏感，因此成功轉(zhuǎn)染這些細(xì)胞是非常困難的。

為了滿足使用Nucleofector電轉(zhuǎn)技術(shù)轉(zhuǎn)染人原代肝細(xì)胞的需要，在這篇描述了保持細(xì)胞功能下的兩個(gè)電轉(zhuǎn)程序:DS-150和EX-147。

圖1. D- Nucleofector^TM System and transfection procedure

用熒光顯微鏡分別檢測(cè)pmax GFP^TM質(zhì)粒DNA和Cleancap mCherry RNA的轉(zhuǎn)染效率；并分析細(xì)胞活力、膽汁管形成、白蛋白分泌和CYP3A4、CYP1A2和CYP2B6代謝產(chǎn)物的生成。

圖2. Image of CLF-staining were combined with corresponding pictures of red mCherry fluorescence

使用DS-150程序?qū)NA的電轉(zhuǎn)效率高達(dá)20%，對(duì)mRNA的電轉(zhuǎn)效率高達(dá)85%，并持續(xù)培養(yǎng)7天。在最初的轉(zhuǎn)染后，觀察到存活率、白蛋白分泌和CYP3A4活性的輕微下降，在7天的療程后恢復(fù)。轉(zhuǎn)染的PHH形成了復(fù)雜的、分支狀的膽管網(wǎng)絡(luò)，并在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中保持了良好的形態(tài)。

為了達(dá)到更高的效率，使用EX-147程序，在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)DNA轉(zhuǎn)染效率高達(dá)68%。然而，隨著時(shí)間的推移與未轉(zhuǎn)染對(duì)照相比，細(xì)胞活力和特征性肝功能降低，限制了該項(xiàng)目用于短期研究。

綜上所述，對(duì)于原代肝細(xì)胞，我們開(kāi)發(fā)了“高效DNA程序”和“高功能mRNA程序”,有效的DNA和mRNA表達(dá)并保留功能長(zhǎng)達(dá)7天，從而改善了主要人類(lèi)肝細(xì)胞在藥物代謝機(jī)制研究中的使用。

Lonza不僅能提供高質(zhì)量的起始材料，以確保肝細(xì)胞的高活性和功能性，也提供溫和高效的轉(zhuǎn)染處理過(guò)程。

Lonza原代細(xì)胞業(yè)務(wù)

01 龐大的細(xì)胞種類(lèi)和供者庫(kù)

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參考文獻(xiàn)

1. Gresch O, Enfel FB, Nesic D, Tran TT, England HM, Hickman ES, et al. New non-viral method for gene transfer into peimary cells. Methods. 2004; 33(2):151-163

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